深入剖析荧光细胞分析仪基于荧光标记与检测的底层原理

　　荧光细胞分析仪基于荧光标记与检测原理，实现对细胞的精准分析。其底层原理主要涉及荧光标记、激发与发射、信号采集与分析等环节。

　　荧光标记是关键步骤，利用荧光蛋白或荧光素酶报告基因作为标志物，如绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（RFP），通过转基因技术构建到载体上，对研究细胞进行标记。这些标志物与细胞内的特定分子结合，从而实现对目标分子的标记。

　　在检测过程中，荧光细胞分析仪使用特定波长的光作为激发光源，通常为紫外光或可见光。当激发光照射到被标记的细胞上时，荧光物质吸收光能并跃迁到高能级状态。由于高能级状态不稳定，荧光物质会迅速返回低能级状态，并在此过程中发射出特定波长的荧光。

　　发射出的荧光信号被荧光细胞分析仪的光学系统收集并传输至检测器。检测器将荧光信号转换为电信号，再经过数据处理系统的处理，如放大、滤波、数字化等操作，最终得到细胞的定性或定量分析结果。

　　以CountstarRigel全自动荧光细胞分析仪为例，它基于图像法检测，配合多荧光通道，通过采集图像中的细胞信息，进行定量分析。它既能提供细胞群的统计数据，又可以获得单个细胞的图像，从而提供细胞形态学信息。图像采集系统同时产生明场以及四张荧光图像，让实验结果更为直观。